在前期内容中,我们讲解了赛纳生物双模式测序中BitSeq测序原理的介绍,同时展示了赛纳生物S100基因测序仪BitSeq在宏基因组mNGS中的具体表现。
与mNGS广覆盖、无偏倚不同,tNGS利用靶向扩增或捕获的方式,可用于检测一组病原体、基因子集或感兴趣的特定基因组区域。tNGS物种特异性高,所需数据量更小,检测速度及数据分析也更快,与S100基因测序仪BitSeq模式结合,具有了更高的应用便捷性。
本期内容,我们就来讲讲,基于BitSeq的tNGS该如何设计多重扩增引物。
图1:引物池设计总流程
第一步
确定目标物种及基因区域
第二步
生成保守性序列集
针对目标物种/基因,通过数据库进行序列收集和过滤,根据序列聚类分析结果,形成保守性序列集合,再将每个序列集合生成一致性序列,即可用于后续分析。
图2:目标物种聚类分析结果
第三步
特异性区域筛选
第四步
引物设计
第五步
引物池评估
图4:二聚体分析结果
完成上述五个步骤,就可以生成一个可用于BitSeq快速测序模式的tNGS引物池啦~赛纳生物也即将推出tNGS引物设计集成小工具,可以满足引物设计、引物池评估等分步功能,欢迎有兴趣的小伙伴一起试用
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